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KAPA HiFi高保真DNA聚合酶及ReadyMix
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KAPA HiFi高保真DNA聚合酶及ReadyMix
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产品详情

产品介绍

1、KAPA HiFi高保真酶是二代基因工程酶,分热启动版和非热启动版,保真性强,活力超高。具有以下特点:

1)超高保真,通过大规模二代测序得出的出错率:2.8×10-7

2)可以扩增各种复杂模板;

3)扩增片段长,扩增基因组可达15kb,质粒DNA或噬菌体DNA可达18kb;

4)扩增速度快,节省75%以上的时间;

5)KAPA高保真热启动酶,含有2中buffer,分别用于常规模板和高难度模板。

2、应用

1)基因定点突变;2)测序;3)蛋白表达。

3、产品表现

1)超级保真、灵敏

2)扩增复杂模板————无可匹敌

3)退火温度对条带特异性的重要性

4、PCR反应

1)推荐反应体系

2)推荐反应参数

  注意事项:

1)HiFi Buffer中盐离子浓度较高,影响DNA变性/退火,所以复杂模板需要较长的起始变性温度,5min;GC Buffer主要针对高GC或含有稳定二级结构的模板,仅当HiFi Buffer效果不佳时使用,但其会降低保真性;

2)每个循环中变性条件为98℃ 20s;

3)最佳退火温度需通过梯度PCR优化得到;

4)推荐延伸时间:30s/kb;若模板浓度高,可降低延伸时间,但较长的延伸时间会增加实验的灵敏度和产量;

5)该体系可扩增≥10kb的目的基因片段。

6)根据实验要求可调整HiFi酶的浓度,范围0.25U-1.0U/25μl;

7)HiFi高保真酶扩增产物是平末端,若要连接到T载体上,扩增产物纯化后再进行加A。

5、问题及解决方案


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