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TOYOBO ReverTra Ace® qPCR 系列
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TOYOBO ReverTra Ace® qPCR 系列
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产品详情

用途


Realtime PCR用cDNA的合成


说明



ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)是利用本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』开发的Realtime PCR用的逆转录试剂盒,是包含逆转录反应用的所有组分的5×浓度的完全预混型试剂,只需添加模板RNA和水即可迅速地开始反应。另外,由于采用了最适用于Realtime PCR用短链目的片段cDNA合成的反应组分,可在短时间内高效率地制备适用于Realtime PCR的cDNA模板。




ReverTra Ace®qPCR RT试剂盒(Code No.FSQ-101)采用了本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』,反应效率非常出色。另外,通过改良,使得带入到Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小,即使在PCR反应体系中添加20%体积的逆转录反应液,也能表现出良好的扩增线性。因此,最适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。由于精简了试剂盒的构成,可非常简便地进行操作。


特征

可得到更广的可定量扩增区域

将Oligo dT 与Random Primer按最适比例预混,可均一、高效地在RNA全序列范围内进行逆转录,因此可得到更广的可定量扩增区域。

与Realtime PCR试剂的配合性良好

本品为放置于-20℃也不会冻结的完全预混型试剂。只要添加模板RNA和水,就可以简便高效率地合成cDNA,且重复性良好。

完全预混型试剂(FSQ-201)

本品为放置于-20℃也不会冻结的完全预混型试剂。只要添加模板RNA和水,就可以简便高效率地合成cDNA,且重复性良好

容易配制逆转录反应的阴性对照(FSQ-201)

因为添附有相同的预混型no-RT对照,能够方便地配制逆转录反应的阴性对照。

实验例


在ReverTra Ace® qPCR RT Kit的反应体系(10μl)中,分别添加HeLa细胞来源的total RNA 0.5μg - 0.5pg,分别进行逆转录反应。然后,采用和实验例2同样的方法进行cDNA合成量的比较。结果可见,在探讨的范围内,模板RNA的量和cDNA的得率密切相关,但无论模板RNA量的多寡,仍可维持很高的cDNA合成效率。由此可见,在目的片段浓度有差异的样品之间,逆转录反应效率的变化并不大,因此可将定量结果的误差控制在最小范围内。



2.与用其他公司产品cDNA合成量的比较


以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板,根据各公司试剂盒推荐的条件进行逆转录反应。然后,在Realtime PCR反应液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分别添加上述的逆转录反应液各1% (V/V),用Realtime PCR对β-Actin和Polymerase ε的cDNA量进行定量。结果可见,在使用本试剂盒的情况下,两个目的片段都有最高的得率。

3. RNase H 处理与否对检测灵敏度影响的比较


以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板,使用ReverTra Ace® qPCR RT Kit(蓝线)及另外添附RNase H的B公司cDNA合成试剂盒,按各自推荐的实验步骤进行逆转录反应(B公司试剂盒分别按RNase H处理(红线)/未处理(橙线)两种方法进行)。然后,按和实验例1同样的方法检测β-Actin的扩增效果。结果显示,用B公司的试剂盒RNase H未处理(橙线)的情况下,检测效果大幅下降。而用ReverTra Ace® qPCR RT Kit(蓝线)进行反应,即便不追加RNase H处理也能显示出很高的扩增效率。已经过实验证明,用本试剂盒RNase H处理与否灵敏度相等。
※本试剂盒不包含RNase H处理步骤。

4.与其他公司预混型cDNA合成试剂的逆转录效率(cDNA合成量)的比


以HeLa total RNA 100ng为模板,按各公司试剂盒推荐条件进行逆转录,然后进行Realtime PCR对5种目的基因进行定量。结果显示,使用本试剂盒的cDNA得率更高。

●cDNA合成

试剂:ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)及其他公司同类(预混型)产品
模板:HeLa total RNA 100ng /10μl反应体系
条件:按各公司试剂盒推荐的条件进行实验

●Realtime PCR

试剂:THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
模板:上述cDNA 2μl/20μl反应体系(添加量10%)
Target:有代表性的5种基因
测定:Applied Biosystems 7900HT


相关产品信息

产品名称产品型号产品规格产品价格
ReverTra Ace® qPCR RT Master MixFSQ-101200次/份商议
ReverTra Ace® qPCR RT Master MixFSQ-201200次/份商议




产品说明书
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