用途

Realtime PCR用cDNA的合成

说明

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)是利用本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』开发的Realtime PCR用的逆转录试剂盒，是包含逆转录反应用的所有组分的5×浓度的完全预混型试剂，只需添加模板RNA和水即可迅速地开始反应。另外，由于采用了用于Realtime PCR用短链目的片段cDNA合成的反应组分，可在短时间内高效率地制备适用于Realtime PCR的cDNA模板。

ReverTra Ace®qPCR RT试剂盒(Code No.FSQ-101)采用了本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』，反应效率非常出色。另外，通过改良，使得带入到Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小，即使在PCR反应体系中添加20％体积的逆转录反应液，也能表现出良好的扩增线性。因此，适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。由于精简了试剂盒的构成，可非常简便地进行操作。

特征

●可得到更广的可定量扩增区域

将Oligo dT 与Random Primer按合适比例预混，可均一、高效地在RNA全序列范围内进行逆转录，因此可得到更广的可定量扩增区域。

●与Realtime PCR试剂的配合性良好

本品为放置于-20℃也不会冻结的完全预混型试剂。只要添加模板RNA和水，就可以简便高效率地合成cDNA，且重复性良好。

●完全预混型试剂(仅FSQ-201)

本品为放置于-20℃也不会冻结的完全预混型试剂。只要添加模板RNA和水，就可以简便高效率地合成cDNA，且重复性良好。

●容易配制逆转录反应的阴性对照(仅FSQ-201)

因为添附有相同的预混型no-RT对照，能够方便地配制逆转录反应的阴性对照。

实验例

2.与用其他公司产品cDNA合成量的比较

以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板，根据各公司试剂盒推荐的条件进行逆转录反应。然后，在Realtime PCR反应液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分别添加上述的逆转录反应液各1% (V/V)，用Realtime PCR对β-Actin和Polymerase ε的cDNA量进行定量。结果可见，在使用本试剂盒的情况下，两个目的片段都有较高的得率。

3. RNase H 处理与否对检测灵敏度影响的比较

以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板，使用ReverTra Ace® qPCR RT Kit（蓝线）及另外添附RNase H的B公司cDNA合成试剂盒，按各自推荐的实验步骤进行逆转录反应(B公司试剂盒分别按RNase H处理（红线）/未处理（橙线）两种方法进行)。然后，按和实验例1同样的方法检测β-Actin的扩增效果。结果显示，用B公司的试剂盒RNase H未处理（橙线）的情况下，检测效果大幅下降。而用ReverTra Ace® qPCR RT Kit（蓝线）进行反应，即便不追加RNase H处理也能显示出很高的扩增效率。已经过实验证明，用本试剂盒RNase H处理与否灵敏度相等。 ※本试剂盒不包含RNase H处理步骤。

4.与其他公司预混型cDNA合成试剂的逆转录效率（cDNA合成量）的比

●cDNA合成

试剂:ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)及其他公司同类(预混型)产品
模板:HeLa total RNA 100ng /10μl反应体系
条件:按各公司试剂盒推荐的条件进行实验

●Realtime PCR

试剂:THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
模板:上述cDNA 2μl/20μl反应体系(添加量10%)
Target:有代表性的5种基因
测定:Applied Biosystems 7900HT

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